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              RT-PCR试剂盒实验请注意

              浏览次数:21发布日期:2021-11-25
                RT-PCR试剂盒反应就是从RNA反转录至cDNA,然后通过PCR反应扩增cDNA的过程。Super一步法RT-PCR(AMV)试剂盒采用了一步反应法完成整个RT-PCR反应,即RNA-cDNA-PCR反应操作在同一反应体系中进行,反应过程中不需增加额外的步骤,就可完成整个RT-PCR反应,同时整个反应系统且含有电泳时所需要的试剂,可直接上样电泳。本试剂盒具有方便、简捷、灵敏度高、重复性好的特点,可适用于各种动、植物、病毒RNA的PCR检测。
                RT-PCR试剂盒实验请注意:
                1.用户可根据自己的情况调整优化PCR反应扩增参数:
                ·退火温度:可根据实际情况适当地提高或降低退火温度(50℃~65℃)。
                ·延伸时间:延伸时间因目的序列长度的不同而不同
                ·循环次数:cDNA量较少时,循环次数可增加为40~50次
                ·调整镁离子的浓度
                2.用户可根据本试剂盒提供的β-actin引物(阳性对照)验证RT-PCR体系是否良好(选做):
                (1)使用前每个组份轻轻混匀,然后2000rpm离心20s;
                (2)灭过菌且无核酸酶的0.2mlPCR管,依次加入
                (3)轻混匀,2000rpm离心20s后进行RT-PCR反应;RT反应条件:42℃保温1hr PCR扩增条件:94°C,5min;
                94°C变性,30sec;
                54°C退火,45s;
                72°C延伸,1min;
                33个循环;
                72°C,10min,
                (4)应结束后,取反应液10uL进行琼脂糖凝胶电泳,确认β-actin基因目的产物片断为359bp。
                以上就是这篇文章的大致内容,看完这文章,你有了解到你想知道的内容吗?如果你想了解更多,欢迎关注我们的网站,我们会定期的更新一些新的内容供大家浏览阅读。
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